TSKgel Protein A-5PW色譜柱

TSKgel Protein A-5PW 色譜柱專為多種抗體的快速分離和準(zhǔn)確定量而設(shè)計。從收獲的細(xì)胞培養(yǎng)液中捕獲并準(zhǔn)確定量單克隆抗體，每次進(jìn)樣分析可在不到2分鐘內(nèi)完成。該色譜柱無需再生或清洗即可進(jìn)行超過2000次進(jìn)樣分析。

TSKgel Protein A-5PW 色譜柱填充了高交聯(lián)度的羥基化甲基丙烯酸聚合物珠，允許在色譜分析中使用高流速，同時保持色譜效率、峰寬和分離度。其重組蛋白A配基是經(jīng)過密碼子修飾的C結(jié)構(gòu)域六聚體。這種增強(qiáng)型重組蛋白A配基通過多點附著鍵合在TSKgel 5PW 基質(zhì)微球上，從而在0.1 mol/L NaOH溶液中具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。

TSKgel Protein A-5PW 色譜柱具有寬泛的上樣量范圍，能夠準(zhǔn)確測定細(xì)胞培養(yǎng)液處理不同階段中單克隆抗體的效價。其低水平的蛋白A脫落率，使其成為用于初步表征的小規(guī)模單克隆抗體純化的理想選擇。

TSKgel Protein A-5PW 是一款親和（AFC）色譜柱，該色譜柱是在多孔親水性聚合物基質(zhì)的 TSKgel G5000PW 填料表面導(dǎo)入重組 Protein A 官能團(tuán)，并充填到 PEEK 柱管內(nèi)。

由于 Protein A 可與 IgG 的 Fc 區(qū)域發(fā)生特異性結(jié)合，所以Protein A可以從含有IgG和雜質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣品中特異性吸附分離 IgG。此外，通過已知濃度的 IgG 制作校準(zhǔn)

曲線，可以定量濃度未知樣品中的 IgG。

TSKgel Protein A-5PW 色譜柱的基質(zhì)、官能團(tuán)和官能團(tuán)鍵 合 方 法 與 散 裝 填 料 TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F 相同。因此， 這 款 色譜柱與 TOYOPEARL  AF-rProtein A HC-650F 具有相似的分離選擇性能。

由于基質(zhì)的粒徑大、機(jī)械強(qiáng)度高，該色譜柱可在高流速條件下使用，也可以用于 IgG 的高通量分析。而且，由于溶劑變化引起的填料溶脹效應(yīng)比較小，所以可以在流動相中添

加有機(jī)溶劑。

此外，該色譜柱還采用了化學(xué)穩(wěn)定性高、耐堿性的官能團(tuán)，所以可使用 NaOH 水溶液進(jìn)行清洗。使用 NaOH 水溶液清洗色譜柱時，請從進(jìn)樣閥注入 0.1 mol/L NaOH 水溶液 0.5

?2 mL。

2-2. 標(biāo)準(zhǔn)分離條件

多數(shù) IgG 在中性條件下（pH 7.0?7.5）被 Protein A 吸附，在酸性條件下（pH 2.5?3.5）洗脫，因此使用 TSKgel Protein A-5PW 分離抗體時，通常采用兩種 pH 不同溶液的階

梯式梯度洗脫法。

吸附和洗脫的流動相一般使用磷酸緩沖液，但流動相也可以使用低 pH 值的檸檬酸鹽緩沖液。采用吸附緩沖液預(yù)先平衡色譜柱后（使用 5 倍以上柱體積的緩沖液平衡），進(jìn)樣

后，僅 IgG 被吸附在柱子上。之后，更換成洗脫用流動相，洗脫出 IgG。

可以在流動相內(nèi)添加高濃度鹽（比如 0.15 mol/L NaCl等），不過疏水性高的 IgG 在色譜柱上容易發(fā)生非特異性吸附，對此需多加留意。此外，分析疏水性高的 IgG 時，在平

衡液和洗脫液中添加乙醇等水溶性有機(jī)溶劑或精AN酸（0.2mol/L）可以有效抑制非特異性吸附。但是，上述情況可能會因更換流動相導(dǎo)致基線波動，因此在進(jìn)樣前，就請更

換流動相，并進(jìn)行確認(rèn)。

流動相示例

例 1

流動相 A：20 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 7.4

流動相 B：20 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.5

例 2

流動相 A：20 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 7.4/乙醇=90/10（v/v）

流動相 B：20 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 2.5/乙醇=90/10（v/v）

例 3

流動相 A：20 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 7.4

流動相 B：50 mmol/L 檸檬酸鈉緩沖液，pH 2.5

高性能親和色譜柱 TSKgel Protein A-5PW色譜柱耐用性良好，可使用堿性溶液來清洗，適用于對含有較多雜質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)液中的IgG 進(jìn)行快速和高精度定量。此外，IgG 的定量范圍廣，可用于分析培養(yǎng)初期的低濃度樣品至高濃度樣品。

TSKgel Protein A-5PW 產(chǎn)品規(guī)格與訂購信息

規(guī)格參數(shù)

項目參數(shù)

孔徑100 nm

粒徑20 µm

pH穩(wěn)定性2.5 - 12

排阻限1,000 kDa

配基重組蛋白A（C結(jié)構(gòu)域六聚體）

配基密度0.9 - 1.0 g/L 凝膠

訂購信息

產(chǎn)品編號 (P/N)描述尺寸

0023483TSKgel Protein A-5PW 色譜柱4.6 mm 內(nèi)徑 x 3.5 cm 長度

TSKgel Protein A-5PW色譜柱

南通海箬化學(xué)有限公司